УДК 542.934:572.7:577.17.049:611:428:612.67

Действие фитонутриентов (биофлавоноидов)

на брыжеечные лимфоузлы в молодом возрасте

Николайчук Кирилл Михайлович – студент Института медицины и психологии им. Зельмана Новосибирского государственного университета

Горчаков Владимир Николаевич – доктор медицинских наук, профессор Научно-исследовательского института клинической и экспериментальной лимфологии – филиала Института цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук

Веременко Анастасия Сергеевна – студент Института медицины и психологии им. Зельмана Новосибирского государственного университета

Быстрова Валерия Игоревна – студент Института медицины и психологии им. Зельмана Новосибирского государственного университета

Шаймарданова Диана Рамильевна – студент Института медицины и психологии им. Зельмана Новосибирского государственного университета

Аннотация: Основной целью данной работы послужило изучить действие биофлавоноидов на морфофункциональные характеристики, во взаимосвязи с гидратационными параметрами брыжеечных лимфоузлов в молодом возрасте. С этой целью в работе используется оригинальное фитосредство, которое включает биофлавоноиды лекарственных растений Сибири и пищевые волокна. Показана способность фитонутриентов положительно влиять на структуру, гидратацию и микроэлементный профиль брыжеечного лимфоузла в молодом возрасте. Фитосредство проявляет положительный лимфотропный и структурно-модифицирующий эффекты. Последние проявляются в избирательной модификации компартментов, оптимизации параметров гидратации и микроэлементного профиля брыжеечного лимфоузла в молодом возрасте.

Ключевые слова: нутрицевтики, биофлавоноиды, брыжеечные лимфоузлы, фитостимуляция, гидратация, микроэлементый профиль.

Введение

Молодой возраст сопровождается воздействие на организм большого числа стрессовых факторов (большие физические нагрузки, физические факторы, химические факторы, стресс и др.), обуславливающих снижение эффективности деятельности различных систем органов – это актуально также для лимфатической системы. Несмотря на то, что молодой организм имеет высокий компенсаторный потенциал, длительное воздействие стрессовых факторов способно снижать лимфодренаж и иммунную защиту в соответствующем лимфатическом регионе, за счет структурной модификации лимфатической ткани соответствующих лимфоузлов.

Лимфатические узлы брыжеечного региона обеспечивают иммунную защиту и дренаж лимфы от органов пищеварения. Данная локализация особенно обуславливает снижение морфофункциональных параметров брыжеечных лимфоузлов ввиду постоянного контакта с агрессивными агентами. В связи с этим становится актуальным вопрос поиска средств, способных нивелировать действия стрессовых факторов и оптимизировать параметры лимфатического русла. В связи с этим заслуживает особого внимание оригинальное фитосредство, основным действующим веществом которого являются биофлавоноиды растений [1].

Основная цель работы – оценить влияние фитонутриентов (флавоноидов и микроэлементов) на морфофункциональные параметры брыжеечных лимфоузлов в молодом возрасте.

Материалы и методы

Исследование проводилось в соответствии с принципами биоэтики, правилами лабораторной практики (GLP, European Communities Council Directives of 24 November 1986, 86/609/EEC), изложенных на Женевской конференции (1971), а также в документах «Об утверждении правил лабораторной практики», «О гуманном обращении с экспериментальными животными» (Минздрав СССР № 775 от 12.08.1977), «Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985), руководство по лабораторным животным [2] и в соответствии с приказом МЗ РФ № 267 от 19.06.2003. Болезненные операции с животными проводились под общим эфирным наркозом.

В эксперименте было задействовано 60 белых крыс-самцов Wistar в возрасте 3-5 месяцев. Такой возраст соответствует 16-20 годам человека, исходя из коэффициента 1,7 определяющего соотношение возрастов человека и крысы [3]. Объект исследования – брыжеечные лимфоузлы молодых животных. В процессе работы все крысы получали комбикорм ПК-120-1 и имели неограниченный доступ к воде. В течение одного месяца 50% испытуемым животным давали вместе с основным кормом таблетированный фитопрепарат в суточной дозе 0,1-0,2 г\кг. Фитокомпозиция включала измельченные лекарственные растения Сибири (бадан, родиола розовая, копеечник сибирский, черника, смородины, шиповник майский и др.). Аналогом фитокомпозиции является биоактивная добавка «Лимфофит» серии «Гармония Вита». Основными биоактивными фитонутриентами являются комплекс флавоноидов и биоэлементы. Комплекс флавоноидов содержал катехины, флаванолы антоцианы и антоцианидины и другие. Определение флавонолгликозидов в перерасчете на рутин служило подтверждением подлинности фитосредства. . Растения обладают свойством концентрировать микроэлементы, что обуславливает их использование в качестве дополнительного источника данных элементов [3]. Биоэлементы (марганец, цинк, медь, селен, железо) относятся к разряду эссенциальных и в виде ионов и соединений с белками, ферментами активно участвуют в метаболизме и в работе иммунной системы. Их польза зависит от формата доставки (пищевой ингредиент или пищевая добавка) и от наличия доказанных фармакологических свойств и доступности [4], присущих нутрицевтикам и парафармацевтикам [5].

При выполнении работы были использованы следующие методы:

• Гистологический метод – основной метод изучения структуры лимфоузла при помощи световой микроскопии. Лимфоузлы фиксировали в 10% формалине, затем выполняют стандартную схему проводки и заливки материала в парафин. Изготовленные гистосрезы окрашивали при помощи разных красителей (гематоксилин и эозин, азур и эозин, толуидиновый синий, трихромный по C. Masson) и выполняли морфометрию с применением точечного метода. При помощи морфометрической сетки проводили оценку удельной площади структурно-функциональных зон лимфоузла и осуществляется подсчет клеток на площади 2025 мкм² при увеличении микроскопа х900.
• Термогравиметрический метод – позволяет оценить жидкостные характеристики лимфатического узла (общая вода, водные фракции). Метод выполняется в соответствии с рекомендациями Н.Ф. Фаращука, согласно которым лимфоузлы высушиваются при стандартной температуре с регистрацией изменения их массы на аналитических весах. На основе известных параметров объема органа и площади его структур производили расчет объема жидкости, приходящейся на каждый функциональный компартмент лимфоузла (принцип Кавальери–Акера–Глаголева).
• Метод РФА СИ. Содержание микроэлементов (Se, Mn, Fe, Cu, Zn) в лимфатических узлах исследовали при помощи рентгенфлуоресцентного анализа с использованием синхротронного излучения (РФА СИ). В работе использовали оборудование ЦКП «СЦСТИ» на базе УНУ «Новосибирский ЛСЭ» / «Комплекс ВЭПП-4 – ВЭПП-2000» в Институте ядерной физики СО РАН, Новосибирск [6].
• Статистическая обработка полученных данных проводится с помощью программы Excel и StatPlus Pro, AnalystSoft Inc.

Результаты и обсуждение

Брыжеечные лимфатические узлы молодых животных характеризуются высокой иммунной активностью из-за активной работы пищеварительного тракта. Прием фитонутриентов является дополнительной пищевой нагрузкой, позволяющей оптимизировать ряд морфофункциональных параметров лимфоузла. Отмечено отсутствие изменения морфотипа брыжеечного лимфоузла, он остается – компактным, что имеет значение для выполнения функций. Величина корково-мозгового соотношения (индекс К/М) имеет тенденцию к снижению на фоне действия биофлавоноидов. В корковом веществе лимфоузла расширяется площадь лимфоидных узелков (в 1,3–1,5 раза), что обусловливает относительное уменьшение площади межузелковой части коры. В мозговом веществе на фоне фитокоррекции наблюдается относительное увеличение размера мозговых тяжей на 15%, мозгового лимфатического синуса на 12% (рисунок 1). Расширение вторичных фолликулов и мозговых тяжей, ответственных за гуморальный иммунитет (B-зона), приводит к увеличению в 1,3 раза общей площади брыжеечного лимфоузла (график 1). Размер остальных структур мало изменился после фитонутриентной поддержки организма (график 1).

График 1. Площадь структурно-функциональных зон брыжеечного лимфоуpла молодых животных до и после приема биоактивного фитокомпозиции (БАФ), %.

Рисунок 1. Расширенный мозговой лимфатический синус с мозговыми тяжами в лимфоузле молодых животных, принимавших биоактивный фитосбор. Окраска гематоксилином и эозином. Общее увеличение 120х.

Прием фитосбора позволяет в лимфоидных узелках молодых животных увеличить число бластов (в 1,4 раза), средних (в 1,3 раза) и малых (на 8%) лимфоцитов, их соотношение становится 1:2:3 (рисунок 2). В паракортикальной области снижается число малых лимфоцитов (в 1,5 раза), плазмоцитов (1,6 раза) и возрастает количество бластов (в 1,2 раза), макрофагов (в 1,3 раза). В мозговых тяжах увеличивается число плазмоцитов (в 1,5 раза), малых (в 1,3 раза) и средних (в 1,2 раза) лимфоцитов (таблица 1).

Рисунок 2. Бласты и другие клетки лимфоидного ряда в лимфоузле. Молодые животные. Фитотерапия. Окраска толуидиновым синим. Общее увеличение 960х.

Таблица 1. Количественная характеристика клеток на единице площади структурно-функциональных зон брыжеечного лимфоузла молодых животных и после приема биоактивной фитокомпозиции (БАФ).

КЛЕТКИ	Молодые животные (3-5 месяцев, n=20)	Молодые животные + БАФ (n=20)	P
Лимфоидные узелки
Лимфобласты	3,40±0,22	4,87±0,29	P < 0,001
Средние лимфоциты	7,40±0,48	9,75±0,58	P < 0,01
Малые лимфоциты	13,70±0,81	14,81±0,73	P > 0,05
Макрофаги	3,85±0,26	4,12±0,21	P > 0,05
Паракортикальная область
Лимфобласты	3,8±0,33	4,42±0,25	P > 0,05
Средние лимфоциты	6,05±0,34	6,92±0,40	P > 0,05
Малые лимфоциты	12,2±0,81	8,28±0,76	P < 0,01
Ретикулярные клетки	1,30±0,15	0,85±0,07	P < 0,05
Макрофаги	4,63±0,29	5,96±0,18	P < 0,001
Плазмоциты	1,60±0,16	0,95±0,07	P < 0,01
Эозинофильные гранулоциты	0,30±0,04	0,32±0,04	P > 0,05
Мозговые тяжи
Плазмобласты	2,60±0,18	2,58±0,18	P > 0,05
Плазмоциты	8,02±0,59	11,88±0,62	P < 0,001
Малые лимфоциты	5,30±0,29	6,93±0,36	P < 0,01
Средние лимфоциты	4,0±0,26	3,35±0,18	P > 0,05
Макрофаги	3,68±0,26	3,78±0,21	P > 0,05
Ретикулярные клетки	0,80±0,07	1,15±0,11	P < 0,05
Эозинофильные гранулоциты	0,30±0,04	0,35±0,04	P > 0,05
Мозговой лимфатический синус
Малые лимфоциты	7,05±0,33	7,67±0,40	P > 0,05
Макрофаги	3,45±0,26	3,97±0,25	P > 0,05
Ретикулярные клетки	1,3±0,15	1,4±0,11	P > 0,05
Плазмоциты	3,35±0,18	3,3±0,14	P > 0,05
Эозинофильные гранулоциты	0,20±0,04	0,31±0,04	P > 0,05

Использование фитосбора оказывает регулирующее действие на объем жидкости в лимфоузле молодых животных (график 2). Компенсаторные возможности лимфоузла проявляются в уменьшении объема жидкости на 3,72 %. На фоне фитотерапии отмечается усиление транспорта лимфы через лимфоузлы, что отражается в увеличении коэффициента корреляции до 0,40 (P < 0,05) между показателем общего объема и величиной корково-мозгового соотношения. Фитотерапия у молодых животных увеличивает в 1,5 раза коэффициент гидратации и перераспределяет свободную и связанную фракции воды в структуре лимфоузла, таким образом, что усиливается лимфоток на фоне разгрузки лимфатических синусов (график 2).

График 2. Гидратационные характеристики брыжеечного лимфоузла молодых животных и после приема биоактивной фитокомпозиции (БАФ), %.

Курс фитотерапии в молодом возрасте повысил в 1,6 раза концентрацию меди в брыжеечном лимфоузле (график 3). Со стороны содержания остальных микроэлементов в брыжеечном лимфоузле не было достоверных различий. Избирательное увеличение содержания меди можно связать с ее способностью усиливать пролиферацию клеток, участвовать в энергетических процессах, столь необходимых для обеспечения активного иммунного состояния лимфоузла, свойственном молодому возрасту.

График 3. Микроэлементы в брыжеечном лимфоузле молодых животных до и после приема биоактивной фитокомпозиции (БАФ), мкг/г.

Заключение

Прием фитосбора позволяет расширить синусную систему, увеличить площадь лимфоидных узелков с герминативным центром и мозговых тяжей. Такие структурные преобразования указывают на оптимизацию лимфодренажа и усилении В-звена иммунной системы в молодых брыжеечных лимфоузлах. В основе указанных структурных преобразований лежит модификация клеточного профиля, которая заключается в увеличении числа бластов в лимфоидных узелках и плазмоцитов в мозговых тяжах молодых лимфоузлов. Использование фитосбора положительно отражается на гидратационных характеристиках молодого лимфоузла, происходит увеличение коэффициента гидратации, что указывает на перераспределение водных фракций и стимуляцию лимфодренажа в лимфатическом регионе. Применение фитосбора позволяет повысить концентрацию меди в молодом брыжеечном лимфоузле.

Список литературы

1. Бородин Ю.И., Горчакова О.В., Суховершин А.В., Горчаков В.Н. и др. Концепция лимфатического региона в профилактической лимфологии. – LAP LAMBERT Academic Publishing, 2018. – 73 с.
2. Каркищенко, Н.Н. Лабораторные животные (положение и руководство) / Н.Н Каркищенко. – М.: Межакадемическое изд-во «ВПК», 2003. – 138 с.
3. Гелашвили, О.А. Вариант периодизации биологически сходных стадий онтогенеза человека и крысы / О.А. Гелашвили // Саратовский научно-медиц. журнал, 2008. – Том 4. – № 22. – С.125-126.
4. Корсун, В.Ф. Фитотерапия. Традиции российского травничества / В.Ф. Корсун, Е.В. Корсун. – М.: Эксмо, 2010. – 880 с.
5. Бородин Ю.И., Горчакова О.В., Суховершин А.В., Горчаков В.Н. и др. Концепция лимфатического региона в профилактической лимфологии. – LAP LAMBERT Academic Publishing, 2018. – 74 с.
6. Piminov P.A. Synchrotron Radiation Research and Application at VEPP-4. Physics Procedia. – 2016. – Vol. 84. – P.19- DOI:10.1016/j.phpro.2016.11.005.