УДК 61

Циркулирующие опухолевые клетки при колоректальном раке. Современные возможности и перспективы

Паталяк Станислав Викторович – кандидат медицинских наук, заведующий Отделением дневного стационара Научно-исследовательского института онкологии Томского национального исследовательского медицинского центра Российской академии наук, доцент кафедры Онкологии Сибирского государственного медицинского университета

Шакирова Олеся Давроновна – врач-онколог, аспирант Научно-исследовательского института онкологии Томского национального исследовательского медицинского центра Российской академии наук, лаборант кафедры Онкологии Сибирского государственного медицинского университета

Синянский Лев Евгеньевич – кандидат медицинских наук, младший научный сотрудник Научно-исследовательского института онкологии Томского национального исследовательского медицинского центра Российской академии наук, лаборант кафедры Онкологии Сибирского государственного медицинского университета

Тараканова Валерия Олеговна – младший научный сотрудник Научно-исследовательского института онкологии Томского национального исследовательского медицинского центра Российской академии наук, лаборант кафедры Онкологии Сибирского государственного медицинского университета, ассистент кафедры Онкологии Сибирского государственного медицинского университета

Аннотация: Колоректальный рак (КРР) является одной из ведущих нозологий в структуре онкологической заболеваемости и смертности во всем мире. Высокая смертность пациентов с КРР обусловлена развитием отдаленных метастазов - гематогенное распространение клеток  первичной опухоли считается ключевым механизмом  в образовании метастазов. Анализ циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК) и их кластеров в крови может быть использован для раннего выявления инвазивного рака. ЦОК также имеют прогностическое значение при мониторинге злокачественного заболевания или оценке эффекта от проводимого лечения. В данной статье представлен обзор исследований ЦОК при колоректальном раке, сравнительный анализ систем их обнаружения, а также оценена возможность клинического применения.

Ключевые слова: циркулирующие опухолевые клетки, колоректальный рак, жидкостная биопсия, прогностическую ценность, метастазирование, гетерогенность опухоли.

Актуальность

Колоректальный рак (КРР) является одним из наиболее часто диагностируемых и приводящих к смерти онкологических заболеваний в мире. Высокая смертность пациентов с КРР обусловлена развитием отдаленных метастазов. В России ежегодно выявляется более 65 тысяч случаев КРР (рак ободочной кишки - 37335; прямая кишка, ректосигмоидное соединение, анус – 28199), из них  25% пациентов имеют отдаленные метастазы [1].  По данным M. Kekelidze метастазы обнаруживаются еще у 25% пациентов с КРР после комбинированного лечения [2], а среднее время до прогрессирования составляет 14 месяцев [3]. Современные клинические исследования терапии метастатического КРР демонстрируют неудовлетворительные показатели общей выживаемости пациентов в пределах двух – трех лет [4]. Летальность пациентов с КРР в России ежегодно составляет почти 40 тысяч человек и занимает третье место в структуре онкологической смертности [5].

Несмотря на значительные достижения в области диагностики и прогнозирования течения КРР, показатели смертности от данной патологии до сих пор остаются высокими: совокупная 5-летняя выживаемость достигла 68% (Angenete E., 2019); тогда как 5-летняя выживаемость пациентов с метастатической формой КРР остается на уровне 10% [6].

Неудовлетворительные показатели безметастатической и общей выживаемости обусловливают большое количество исследований, направленных на поиск новых методов раннего обнаружения метастазов КРР или факторов риска их появления. Основными прогностическими параметрами, определяющими риск гематогенной диссеминации, считают глубину прорастания кишечной стенки, лимфогенное метастазирование, степень гистологической злокачественности, положительный край резекции, критерии Tumor Budding, сосудистую и периневральную инвазию [7]. Согласно действующим канонам, лечение КРР на ранней стадии сводится к оперативной резекции органа, пациентам с КРР III стадии и II стадии при наличии факторов неблагоприятного прогноза необходима комбинация операции и адъювантной химиотерапии, системная лекарственная терапия является самостоятельным методом лечения при IV стадии заболевания [7].

Возможность прогнозировать течение КРР способствует выявлению группы пациентов с высоким риском диссеминации опухоли и позволяет  индивидуализировать подход к лечению. Современные рутинные методы, такие как УЗИ, КТ, МРТ или ПЭТ, направлены на поиск отдаленных метастазов, но их использование не дает возможность выявлять ранние метастазы или прогнозировать их появление. Разрабатываются панели ИГХ тестирования первичной опухоли толстой кишки для оценки риска возникновения отдаленных метастазов [8]. ИГХ исследование КРР зачастую основано на маркерах кишечного эпителия – CDX2. Однако учитывая гетерогенную природу КРР для диагностики полезны и другие маркеры, такие как раковый эмбриональный антиген, кальретинин, кадгерин, молекула клеточной адгезии эпителия (англ. Epithelial cell adhesion molecule; EpCAM), цитокератин 20 и 7, опухолевый антиген 19-9, а также MUC2. 

Перспективным методом диагностики злокачественных новообразований служит жидкостная биопсия. Данный метод позволяет определять в плазме крови свободно циркулирующие опухолевые  клетки (ЦОК), опухолевую ДНК (цоДНК) и микроРНК, которые попадают в кровеносное русло в результате некроза, апоптоза или лизиса клеток. Жидкостная биопсия используется также для обнаружения экзосом, представляющих собой везикулы с белками, нуклеиновыми кислотами или липидами.

Данный обзор посвящен изучению роли  циркулирующих опухолевых клеток при колоректальном раке, анализу современных методов выявления ЦОК, а также поиск клинических исследований, в которых изучалась их  прогностическая и клиническая роль. При составлении данного обзора были проанализированы данные из отечественной и зарубежной литературы, опубликованных в период с января 2000 г. по январь 2021 г, в базах данных PubMed, eLibrary и EMBASE.

Общие понятия

В последнее десятилетие пристальное внимание обращено к циркулирующим опухолевым клеткам, выделяемым в кровеносную систему из первичной злокачественной опухоли. Первые упоминания о них относят к  1869 году [9]. Спустя 20 лет в первом выпуске журнала Lancet Стив Пейджет высказал гипотезу метастатического процесса “семени и почвы". Где "семена” – это циркулирующие в крови опухолевые клетки, а “почва” - микроокружение, куда ЦОК попадают с током крови, погружаются в состояние покоя, ожидая сигнала для дальнейшего развития [10]. И на сегодняшний день данная концепция остается актуальной, так как циркулирующие опухолевые клетки обладают наибольшим метастатическим потенциалом, полученным в ходе эволюции опухолевого клона. Этот метаморфоз позволяет ЦОК выживать  в кровеносном русле, противостоять биофизическим и клеточно-опосредованным воздействиям, а также достигать заранее подготовленной для них преметастатической ниши. [11]

Циркулирующие опухолевые клетки при колоректальном раке

У пациентов с колоректальным раком циркулирующие опухолевые клетки могут определяться в кровеносном русле при любой стадии заболевания, однако частота их выявления может быть различной. В исследовании Pantel K. и соавт. оценивались ЦОК на момент постановки диагноза, было показано, что опухолевые клетки в периферической крови обнаруживаются на I стадии в 25% случаев, на II стадии - 33,3%, на III стадии - 26,3% и на IV стадии - 63,6%.  [12].

Непомнящий Е.М. и соавт., изучая связь между  ЦОК и морфо-генетическими характеристиками первичного очага при КРР [13], продемонстрировали, что у пациентов с III стадией и низкой степенью дифференцировки количество ЦОК выше, чем у пациентов с высокой  степенью дифференцировки. А также высокий уровень ЦОК чаще обнаруживается у  тех пациентов, у которых первичная опухоль экспрессирует маркеры апоптоза (р53) (р=0,0383) и  микрососудистой инвазии (CD31, ММП-2) (р=0,0001), что подтверждает концепцию о взаимосвязи выявления ЦОК и более агрессивного течения опухолевого процесса.

Частота выявления ЦОК в крови пациентов с КРР зависит от молекулярного подтипа опухоли – в 90% наблюдений больные с положительным статусом ЦОК  имели   активирующую мутацию гена KRAS, отдаленные метастазы развивались в более ранние сроки [](р<0,05). Аналогичная зависимость наблюдалась при высокой степени гистологической злокачественности,  когда выявление ЦОК наблюдалось в 3,7 раза чаще при низкодифференцированных аденокарциномах [14].

В исследовании  Yang C. и соавт. проанализировали взаимосвязь между ЦОК периферической крови и нутритивным статусом (англ. Controlling Nutritional, CONUT) пациентов с КРР до операции. Статус CONUT включал определение уровня сывороточного альбумина, общего количества периферических лимфоцитов и концентрации общего холестерина. Результаты демонстрировали более низкие показатели безрецидивной и общей выживаемости у пациентов с неблагоприятным статусом CONUT и большим количеством выявленных ЦОК [15]. Обнаруженная связь между количеством ЦОК и уровнем лейкоцитов объясняет влияние иммунной системы на количество ЦОК в периферической крови. Данное взаимодействие заключается в том, что иммунные клетки распознают и уничтожают ЦОК, в результате менее 0,1% ЦОК достигают  отдаленных органов с образованием метастазов.

 Сниженный противоопухолевый иммунитет создает благоприятные условия для пролиферации, миграции и инвазии опухолевых клеток, способствуя тем самым высвобождению ЦОК [16] [17]. Таким образом при уменьшении количества лимфоцитов в периферической крови можно прогнозировать увеличение количества ЦОК.

 Изучение циркулирующих опухолевых клеток может помочь в качестве дополнительного маркера, который будет способствовать определению тактики лечения и  выбору противоопухолевой терапии.

Прогностическое значение выявления ЦОК

Выявление ЦОК может служить маркером прогноза течения заболевания. В исследовании S. Cohen и соавт (2008г) пришли к выводу, что у больных с диссеминированным КРР, в крови которых определяется больше 3 циркулирующих опухолевых клеток (>3 ЦОК), показатель общей и безрецидивной выживаемости статистически ниже. При сравнении двух групп больных, где в первой количество  ЦОК в 7,5 мл было больше или равно 3, а во второй количество ЦОК меньше 3, безрецидивная выживаемость составила соответственно 4,5 против 7,9 мес, а общая — 9,4 против 18,5 мес [18]. Аналогичные результаты были получены в исследовании Chen К и соавт, опубликованном в журнале Clinics 2022, у пациентов с диагнозом КРР II-IV стадией с количеством ЦОК > 6  показатели безрецидивной выживаемости и общей выживаемости были хуже, чем у пациентов с ≤ 6 ЦОК (p < 0,05)  [19]. В другом исследовании зависимость между ОВ и количеством ЦОК была продемонстрирована на  пациентах с колоректальным раком II-IV стадией, которые были разделены на три группы – по  количеству ЦОК. Медиана ОВ при ЦОК 0 составляла 53,5 мес , при ЦОК 1-3 – 46,0 мес, при ЦОК 4-9 – 32,2 мес, при ЦОК ≥10 – 12,4 мес [20]. Таким образом, между количеством ЦОК и общей выживаемостью,  обнаруживается обратная зависимость.

Проведенный Pantel K и соавторами мета-анализ в 2016 году, основанный на прогностической и клинико-патологической оценке циркулирующих опухолевых клеток у больных с неметастатическим КРР, показал, что у ЦОК-положительных пациентов общая выживаемость  и безрецидивная выживаемость ниже, чем у ЦОК-негативных пациентов, вне зависимости от времени взятия образцов крови (до операции/ после операции), стадией заболевания (II / III) и проведенной адъювантной терапии (без/послеоперационной химиотерапии) [21] (P < 0,001). Также в данном мета-анализе было обнаружено, что частота обнаружения ЦОК коррелировала с метастазированием в регионарные лимфатические узлы, инвазией в сосуды, низкой дифференцировкой опухолевых клеток. Ранее подобные результаты  были  продемонстрированы в исследовании Н. Katsuno и соавт (2008г) [22]: у больных КРР в периферической крови среднее количество ЦОК коррелировало с частотой поражения лимфатических узлов (N0-2) (р<0,05).

В нашей стране подобная исследовательская работа была выполнена Китом О.И. и соавт в 2017 году, где было показано, что  у больных КРР при поражении лимфатических узлов ЦОК обнаруживаются в 3 раза чаще, чем у пациентов без поражения лимфоузлов (р<0,05)[18].  Данные исследования подтверждают возможность использования ЦОК в качестве фактора прогноза  клинического течения колоректального рака.

Ряд исследований подтвердили прогностическую ценность выявления ЦОК во время химиотерапии. Так,  в одном из исследований, в котором приняло участие 430 человек с метастатическим КРР,  было выявлено, что у пациентов после 3-4 недель противоопухолевой терапии  показатель прогрессирования заболевания был значительно выше [23], если до начала лечения выделились  ЦОК.  Пациенты с неблагоприятными количеством ЦОК  ( ≥ 3 ЦОК / 7,5 мл крови) имели ниже медиану выживаемости без прогрессирования (PFS; 4,5 против 7,9 месяцев; P = 0,0002) и общую выживаемость (OS; 9,4 против 18,5 месяцев; P < 0.0001). Опираясь на данное исследование, можно предположить, что пациенты  с высоким показателем ЦОК имеют неблагоприятный  прогноз и нуждаются в более агрессивном лечении, разработке индивидуального плана терапии с последующей оценкой количества ЦОК в динамике на фоне проводимого лечения.

Кроме того, большую прогностическую ценность может  представлять не только сам факт выявления ЦОК и их количественная оценка, но и качественный анализ этих клеток. Большинство методик позволяют провести только количественный поиск ЦОК, игнорируя молекулярные особенности отдельных опухолевых клеток. Гетерогенность субпопуляций опухолевых клеток может быть связана с механизмами клонального полиморфизма, т.е. отличие ЦОК  от первичной карциномы  по транскриптомному и протеомному составу.  Возникшая генетическая и фенотипическая вариабельность клеток отражает эволюцию генома, происходящую во время развития опухоли. Это же объясняет  особенности отбора и адаптивности циркулирующих опухолевых клеток, создание гибридных клонов. Определенную роль в этом процессе играет механизм перехода клеток из эпителиального фенотипа в мезенхимальный, который проявляется в частичной или полной утрате эпителиальных клеточных маркеров и  приобретением клетками повышенной способности к миграции и инвазии [24].

Перспективным направлением служит определение в крови гибридных опухолевых клеток. Гибридные ЦОК - слияние нескольких типов клеток, в связи с чем они приобретают признаки стволовых клеток (например, CD44-позитивность) [25], [2] мезенхимо-подобных клеток (например, маркеры кадгерина, экспрессия  Akt-2), обладающих повышенной метастатической активностью и лекарственной устойчивостью [26] . Для выделения данной популяции лучше использовать методы сортировки отдельных циркулирующих опухолевых клеток, так как стандартные методы выделения могут не улавливать эти клетки [27] Еще одной особенностью ЦОК служит способность образовывать гомотипные и гетеротипные кластеры, обладающие большим метастатическим потенциалом, чем одиночные ЦОК. Это связано с повышенной способностью этих клеток  к дифференцировке и пластичности, связанных с экспрессией CD44, молекулой  межклеточной адгезии (ICAM) и эпигенетическим перепрограммированием. Данные процессы лежат в основе повышения выживаемости клеток и уклонения от противоопухолевого иммунитета.[28]

Методы и технологии выделения ЦОК

Методы, используемые для  извлечения и детекции ЦОК, можно разделить на две группы в соответствии с присущими клеткам физическими или биологическими характеристиками, с учетом выявления специфических антигенов, экспрессируемых на поверхности клеток.

К физическим методам можно отнести выделение клеток по их морфологическим и физико-химическим характеристикам: размер, деформируемость, плотность и электрический заряд, без использования специфических антител. Например, при использовании фильтрационного метода фильтры позволяют удалять эритроциты и большинство лейкоцитов из исследуемого образца крови, оставляя на микрофильтре более крупные по размеру ЦОК, после чего клетки могут быть проанализированы с помощью цитоморфологии и иммуноокрашивания [29] [30] , а также использоваться для секвенирование генома. Недостатком методики является вариабельность размеров циркулирующих опухолевых клеток у различных больных и при различных опухолях [31], а также морфологическая трансформация клеток, особенно при феномене эпителиально-мезенхимального перехода (ЭМП), что обусловливает технические трудности обнаружения и фенотипирования ЦОК.

Биологические методы используют определение циркулирующих опухолевых клеток через этапы обогащения клеток на основе иммуноаффинности с последующим их выделением из периферической крови. Так как ЦОК эпителиального происхождения, то они  экспрессируют белок клеточной адгезии эпителия на своей поверхности (EpCAM).  Кроме EpCAM, ЦОК демонстрируют положительную экспрессию, рецепторов  цитокератинов  (CK), являющихся  специфическими маркерами эпителиальных раковых клеток в костном мозге.  Если ЦОК определяются через маркеры эпителиального происхождение - это положительное обогащение [32]. Для обогащения чаще всего используется магнитный захват ЦОК из цельной крови путем смешивания ее с феррожидкостью, состоящей из магнитных частиц, покрытых иммунофлуоресцентными антителами против молекул адгезии эпителиальных клеток с добавлением ядерного красителя (DAPI). ЦОК идентифицируются как ядросодержащие клетки, экспрессирующие цитокератины (CK) и EpCAM, лишенные экспрессии CD45 [33].

Недостатком данной системы является плохая доступность жизнеспособных клеток для последующего анализа в связи с высоким уровнем  захвата апоптотических клеток. Другим недостатком служит то, что феррожидкость вызывает дозозависимую цитотоксичность, а магнитные шарики отрицательно влияют на пролиферацию и метаболизм клеток. Кроме того, существуют популяции ЦОК с низкой экспрессией EpCAM или полным отсутствием [34], которые не будут захваченные данными антителами.

К биологическим методам селекции ЦОК относят также подсчет и выделение их с помощью флуоресцентного сортинга (fluorescence-activated cell sorting, FACS) посредством проточной цитометрии. Данный метод дает возможность получения клеточных клонов высокой степени чистоты, но требует подбора большого количества антител, что является  недостатком метода, так как это может представлять определенную сложность при оценке большого числа параметров из-за перекрытия спектров флуоресценции  [35].

Чувствительность методики можно повысить, используя дополнительно полимеразную цепную реакцию (ПЦР) в режиме реального времени [36] через обратную транскрипцию для идентификации экспрессируемых генов опухоли в ЦОК.  Так, обнаружение гена антиапоптотического белка сурвивина BIRC5, экспрессирующегося в ЦОК, может служить одним из маркеров выявления ЦОК [37].

В некоторых системах используются антитела против антигенов, ассоциированных с лейкоцитами, это называется отрицательным обогащением.

После обогащения ЦОК могут быть обнаружены с помощью прямых методов: на основе антител, таких как иммуноцитохимия (ICC), иммунофлуоресценция (IF) и проточная цитометрия (FACS). Либо с помощью непрямых методов: на основе нуклеиновых кислот, которые измеряют транскрипты мРНК с помощью обратной транскриптазно-полимеразной цепной реакций.

Современные системы ЦОК позволяют из небольшого объема крови больного (2-3 мл), фильтруя ее через «лабиринт стержней», на стенки которого нанесены антитела для фиксации EpCAM, обнаруживать  ЦОК в ламинарном потоке. Данная технология получила название микрофлюидной [38]. В последствии клетки, оставшиеся на панелях, можно дополнительно пометить антителами к нужным маркерам либо определить экспрессию их генов методом ПЦР.

Методы детекции ЦОК постоянно совершенствуются. На данный момент существуют системы, позволяющие проводить многопараметрическую оценку отдельных ЦОК с последующим извлечением отдельных клеток для молекулярного анализа в зависимости от плотности клетки. Затем проводится флуоресцентное окрашивание  на CD45, SYTOX orange (ядерный краситель), панцитокератина и антител EpCAM.

Проводятся также исследования по разработке методов  выделения ЦОК не только из крови in vitro, но и in vivo [39], где в основе лежит стерильная медицинская проволока из нержавеющей стали (в виде катетера), покрытая золотом толщиной 2 мкм и слоем гидрогеля на ее функциональном конце, которые ковалентно связаны с антителами против белка EpCAM. Однако работ по применению такого подхода очень мало, что не позволяет провести сравнительный анализ данного метода в сравнении с методиками in vitro. Стоит отметить, что выделение ЦОК in vivo может быть многообещающим подходом, позволяющим выделять ЦОК в достаточных количествах для мониторинга лечения и дальнейшего молекулярного анализа у пациентов.

Перспективной является технология секвенирование отдельных клеток, где  используются  методы секвенирования по Сэнгеру или NGS, секвенирование одноклеточной РНК для выявления специфических генных мутаций в ЦОК [40].  Технология одноклеточного секвенирования еще не полностью развита, так как существует ряд проблем и недостатков. Например, низкий охват, плохая воспроизводимость,, ложноположительные и ложноотрицательные результаты, а также ошибки в программном обеспечении для секвенирования и сплайсинга. Данный метод позволяет нивелировать влияние гетерогенности опухоли,  так идет сравнение различий между одноклеточными геномами, транскриптомами и эпигенетическими группами среди ЦОК, первичными и метастатическими образованиями[].

Более доступными способом, позволяющими повысить чувствительность и специфичность методов по выявлению гетерогенных ЦОК, является дополнительный анализ специфических опухолевых маркеров, таких как эпидермальный фактор роста (HER2), простатический антиген (PSA), муцин1/2 (MUC1/2), раковый эмбриональный антиген (CEA) [41].

Обсуждение, заключение

Благодаря постоянному развитию диагностических методов и возможностей лечения колоректального рака прогноз для пациентов значительно улучшился за последние десятилетия. Тем не менее, ранняя диагностика, оценка эффективности лечения и прогностическая оценка КРР все еще имеют некоторые ограничения, что подтверждается высокой ежегодной смертностью данной группы пациентов.

В настоящее время разработаны различные платформы, обладающие достаточной чувствительностью, производительностью и эффективностью, для динамического подсчета ЦОК в периферической крови пациентов с КРР. Анализ ЦОК у пациентов с КРР укрепил понимание патогенеза метастазирования и гетерогенности опухоли, что может способствовать разработке системы персонифицированного назначения лекарственной терапии. Кроме того, выделенные ЦОК позволяют исследовать экспрессию белков и кодирующие их гены для оценки прогноза течения КРР. Однако существуют до сих пор нерешенные вопросы для использования ЦОК в реальной клинической практике. Отсутствуют стандартизированные платформы выявления с одинаково высокой чувствительностью и специфичностью, а также существуют проблемы с установлением единого порогового значения ЦОК из-за различий в выборке, методах детекции и сроках забора крови. Большинство исследований ЦОК являются одноцентровыми с небольшими количествами наблюдений, что приводит к разнородным результатам. Несмотря на отсутствие широкого использования ЦОК в клинической практике, их роль в прогностической оценке течения КРР нельзя игнорировать. Поэтому важно, чтобы будущие исследования ЦОК проводились на платформах с высокой чувствительностью и специфичностью.

 Исследования ЦОК должны быть всесторонними и направлены на разработку персонализированного плана лечения пациентов с КРР. Есть основания полагать, что внедрение в клиническую практику определения циркулирующих опухолевых клеток в ближайшем будущем предоставит клиницистам и исследователям новую полезную информацию, помогающую в подборе индивидуальной терапии пациентов с КРР.

Список литературы

1. Каприн А.Д. Состояние онкологической помощи населению России в 2021 году. Под ред. А.Д. Каприна, В.В. Старинского, А.О. Шахзадовой. − М.: МНИОИ им. П.А. Герцена − филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, 2022. − илл. – С. 72, 182
2. Kekelidze M, D'Errico L, Pansini M, Tyndall A, Hohmann J. Colorectal cancer: current imaging methods and future perspectives for the diagnosis, staging and therapeutic response evaluation. World J Gastroenterol. 2013 Dec 14;19(46):8502-14. doi: 10.3748/wjg.v19.i46.8502
3. Räsänen Gunawardene A. et al., 2018
4. Rumpold H., Niedersüß-Beke D., Heiler C. et al. Prediction of mortality in metastatic colorectal cancer in a real-life population: a multicenter explorative analysis. BMC Cancer 20, 1149 (2020). doi: 10.1186/s12885-020-07656-w;
5. Каприн А.Д. Злокачественные новообразования в России в 2021 году (заболеваемость и смертность). Под ред. А.Д. Каприна, В.В. Старинского, А.О. Шахзадовой. − М.: МНИОИ им. П.А. Герцена − филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, 2022. − илл. – С. 135-136
6. Wang, J., Li, S., Liu, Y., Zhang, C., Li, H., & Lai, B. (2020). Metastatic patterns and survival outcomes in patients with stage IV colon cancer: A population-based analysis. Cancer medicine, 9 (1), 361-373.
7. Федянин М.Ю., Гладков О.А., Гордеев С.С., Карачун А.М., Козлов Н.А., Мамедли З.З. и соавт. Практические рекомендации по лекарственному лечению рака ободочной кишки, ректосигмоидного соединения и прямой кишки. Злокачественные опухоли: Практические рекомендации RUSSCO №3s2, 2022 (том 12). 401–454. doi: 10.18027/2224-5057-2022-12-3s2-401-454
8. Синянский Л.Е., Крахмаль Н.В., Паталяк С.В., Афанасьев С.Г., Вторушин С.В. ИЗУЧЕНИЕ ТРЕХЛЕТНЕЙ БЕЗМЕТАСТАТИЧЕСКОЙ ВЫЖИВАЕМОСТИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ЭКСПРЕССИИ МАРКЕРОВ СУРРОГАТНЫХ ПОДТИПОВ РАКА ТОЛСТОЙ КИШКИ // Современные проблемы науки и образования. – 2022. – № 6-1. DOI: 10.17513/spno.32272
9. Chaffer CL, Weinberg RA (2011) Взгляд на метастазирование раковых клеток. Наука 331 (6024): 1559-1564
10. Мун Д.Х., Линдси Д.П., Хонг С., Ван Аз. Клинические показания к циркулирующим опухолевым клеткам и их будущее. Adv Drug Deliv Rev. (2018) 125: 143-50. doi: 10.1016 / j.addr.2018.04.002
11. Aceto, N. et al. (2014) Circulating tumor cell clusters are oligoclonal precursors of breast cancer metastasis. Cell 158,1110–1122
12. Pantel K, Reeh M. Prognostic value of preoperative circulating tumor cells counts in patients with UICC stage I-IV colorectal cancer. PLoS One. 2021 Jun 10;16(6):e0252897. doi: 10.1371/journal.pone.0252897. PMID: 34111181; PMCID: PMC8191913.
13. Непомнящая Е.М., Никипелова Е.А., Нистратова О.В., Новикова И.А., Водолажский Д.И., and Ульянова Е.П.. "Параллели между циркулирующими опухолевыми клетками и некоторыми морфо-генетическими показателями при колоректальном раке" Журнал фундаментальной медицины и биологии, no. 2, 2016, pp. 64-69.
14. Кит О.И., Нистратова О.В., Новикова И.А., Водолажский Д.И., Никипелова Е.А., Непомнящая Е.М., Ульянова Е.П., and Олейникова Е.Н.. "Ассоциация между наличием kras-мутаций в опухоли и количеством циркулирующих опухолевых клеток у больных колоректальным раком" Кубанский научный медицинский вестник, no. 1, 2016, pp. 70-73.
15. Yang C, Wei C, Wang S, Han S, Shi D, Zhang C, Lin X, Dou R, Xiong B. Combined Features Based on Preoperative Controlling Nutritional Status Score and Circulating Tumour Cell Status Predict Prognosis for Colorectal Cancer Patients Treated with Curative Resection. Int J Biol Sci. 2019 May 12;15(6):1325-1335. doi: 10.7150/ijbs.33671. PMID: 31223290; PMCID: PMC6567813.
16. Jacobs RJ, Voorneveld PW, Kodach LL, Hardwick JC. Cholesterol metabolism and colorectal cancers. Curr Opin Pharmacol. 2012;12: 690-5.
17. Wang C, Li P, Xuan J, Zhu C, Liu J, Shan L. et al. Cholesterol Enhances Colorectal Cancer Progression via ROS Elevation and MAPK Signaling Pathway Activation. Cell Physiol Biochem. 2017;42: 729-42
18. Кит О., Шуликов П., Новикова И., Гранкина А., Колесников В., Геворкян Ю., and Солдаткина Н.. "ЦИРКУЛИРУЮЩИЕ ОПУХОЛЕВЫЕ КЛЕТКИ ПРИ КОЛОРЕКТАЛЬНОМ РАКЕ" Врач, no. 5, 2017, pp. 42-45.
19. Чен К, Чен З, Оу М, Ван Дж, Хуан Х, Ву У, Чжун В, Ян Дж, Хуан Дж, Хуан М, Пан Д. Клиническое значение циркулирующих опухолевых клеток в прогнозировании исходов у пациентов с колоректальным раком. Клиники (Сан-Паулу). 2022 7 сентября;77:100070. doi: 10.1016/j.clinsp.2022.100070. PMID: 36087570; PMCID: PMC9464896.
20. Кит О.И., Златник Е.Ю., Новикова И.А., Ульянова Е.П., Демидова А.А., Колесников Е.Н.,Геворкян Ю.А., Солдаткина Н.В., Снежко А.В. Общая выживаемость больных раком ободочной кишки с различным уровнем циркулирующих опухолевых клеток и возможности повышения его прогностической значимости. Сибирскийонкологический журнал. 2022; 21(4): 32–39. – doi: 10.21294/1814-4861-2022-21-4-32- 39
21. Ян С, Цзоу К, Чжэн Л, Сюн Б. Прогностическое и клинико-патологическое значение циркулирующих опухолевых клеток, обнаруженных с помощью ОТ-ПЦР при неметастатическом колоректальном раке: мета-анализ и систематический обзор. Рак BMC. 7 ноября 2017 года;17 (1):725. doi: 10.1186 / s12885-017-3704-8 . PMID: 29115932; PMCID: PMC5688806.
22. Katsuno H., Zacharakis E., Aziz O. et al. Does the Presence of Circulating Tumor Cells in the Venous Drainage of Curative Colorectal Cancer Resections Determine Prognosis? A Meta-Analysis // Ann. Surg. Oncol. - 2008; 15 (11): 3083-91.
23. Сohen SJ, Punt CJ, Iannotti N, Saidman BH, Sabbath KD, Gabrail NY, et al. Relationship of circulating tumor cells to tumor response, progression-free survival, and overall survival in patients with metastatic colorectal cancer. J Clin Oncol. (2008) 26:3213–21. doi: 10.1200/JCO.2007.15.8923
24. Thompson EW., Haviv I. The social aspects of EMTMET plasticity // Nat Med. — 2011. — Vol. 17, № 9. — P. 1048-1049.
25. Theodoropoulos P.A., Polioudaki H., Agelaki S., Kallergi G., Saridaki Z., Mavroudis D., Georgoulias V. Circulating tumor cells with a putative stem cell phenotype in peripheral blood of patients with breast cancer. Cancer Lett. 2010;288:99–106. doi: 10.1016/j.canlet.2009.06.027.
26. Pastushenko I., Blanpain C. EMT Transition States during Tumor Progression and Metastasis. Trends Cell Biol. 2019; 29(3): 212-26. doi: 10.1016/j.tcb.2018.12.001.
27. Rejniak, K. A. (2016). Circulating tumor cells: when a solid tumor meets a fluid microenvironment. Exp. Med. Biol. 936, 93–106. doi: 10.1007/978-3-319-42023-3_5
28. Mu, Z. et al. (2015) Prospective assessment of the prognostic value of circulating tumor cells and their clusters in patients with advanced-stage breast cancer. Breast Cancer Res. Treat. 154, 563–571
29. Hofman et al. 2011 Am J Clin Pathol, Hofman et al. 2012 Cytopathology).
30. Исмаилова Г., Laget S., and Paterlini-Bréchot P.. "Диагностика циркулирующих опухолевых клеток с помощью технологии iset и их Молекулярная характеристика для жидкостной биопсии" Клиническая медицина Казахстана, no. 1 (35), 2015, pp. 15-20.
31. Coumans FA., van Dalum G., Beck M., Terstappen LW. Filtration parameters influencing circulating tumor cell enrichment from whole blood // PLoS One. — 2013. — Vol. 8, №4
32. Galletti, G., Portella, L., Tagawa, S.T. et al. Circulating Tumor Cells in Prostate Cancer Diagnosis and Monitoring: An Appraisal of Clinical Potential. Mol Diagn Ther 18, 389–402 (2014).
33. Bidard FC, Peeters DJ, Fehm T, Nole F, Gisbert-Criado R, Mavroudis D et al (2014) Clinical validity of circulating tumour cells in patients with metastatic breast cancer: a pooled analysis of individual patient data. Lancet Oncol 15:406–414
34. Рао К.Г., Чианезе Д., Дойл Г.В., Миллер М.К., Рассел Т., Сандерс Р.А. Младший и Терстаппен Л.В.: Экспрессия молекулы адгезии эпителиальных клеток в клетках карциномы, присутствующих в крови, а также в первичных и метастатических опухолях. Int J Oncol. 27:49-57. 2005.PubMed/NCBI
35. Wu C., Hao H., Li L., Zhou X., Guo Z., Zhang L., Zhang X., Zhong W., Guo H., Bremner R.M., Lin P. Preliminary investigation of the clinical significance of detecting circulating tumor cells enriched from lung cancer patients. J Thorac Oncol 2009; 4(1): 30-36
36. Аликс-Панабьерес Е., and Пантел К.. "Циркулирующие опухолевые клетки: жидкостная биопсия рака" Клиническая лабораторная диагностика, vol. 59, no. 4, 2014, pp. 60-64.
37. Экспрессия BIRC5 в ЦОК при опухолях толстой кишки / А. В. Орехва [и др.] // Достижения фундаментальной, клинической медицины и фармации [Электронный ресурс] : материалы 75-й науч. сес. ВГМУ (29-30 янв. 2020 г.) / М-во здравоохранения Республики Беларусь, УО "Витебский гос. ордена Дружбы народов мед. ун-т" ; [ред. А. Т. Щастный ; зам. ред. С. А. Сушков ; ред. совет: Адаскевич В. П. и др.]. - Витебск : ВГМУ, 2020. - С. 41-43.
38. Xia J, Chen X, Zhou CZ, Li YG, Peng ZH. Разработка недорогого магнитного микрофлюидного чипа для захвата циркулирующих опухолевых клеток. Нанобиотехнология (2011) 5: 114-20. doi: 10.1049 / iet-nbt.2011.0024
39. Gorges, Tobias M et al. “Enumeration and Molecular Characterization of Tumor Cells in Lung Cancer Patients Using a Novel In Vivo Device for Capturing Circulating Tumor Cells.” Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research 22,9 (2016): 2197-206. doi:10.1158/1078-0432.CCR-15-1416.
40. Van Loo P, Voet T. Single cell analysis of cancer genomes. Curr Opin Genet Dev. 2014;24:82–91. doi: 10.1016/j.gde.2013.12.004
41. Liang, MX., Fei, YJ., Yang, K. et al. Potential values of circulating tumor cell for detection of recurrence in patients of thyroid cancer: a diagnostic meta-analysis. BMC Cancer 22, 954 (2022). https://doi.org/10.1186/s12885-022-09976-5.