"Научный аспект №1-2019" - Естественные науки
Деревнина Нина Алексеевна – кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории Клеточных технологий Национального медицинского исследовательского центра реабилитации и курортологии Минздрава России.
Гильмутдинова Ильмира Ринатовна – кандидат медицинских наук, ведущий научный сотрудник отдела Биомедицинских технологий Национального медицинского исследовательского центра реабилитации и курортологии Минздрава России.
Еремин Петр Серафимович – научный сотрудник лаборатории Клеточных технологий Национального медицинского исследовательского центра реабилитации и курортологии Минздрава России.
Васильева Екатерина Станиславовна – доктор медицинских наук, профессор кафедры Восстановительной медицины и биомедицинских технологий Московского государственного медико-стоматологического университета имени А.И. Евдокимова.
Аннотация: В настоящее время установлена патогенетическая роль состояния микробной экологии кишечника при угревой болезни [1;2;3]. Дисбаланс кишечной симбиотической микробиоты (дисбактериоз) способствует снижению общей и местной резистентности организма, увеличению проницаемости кишечной стенки и проникновению условно-патогенных микроорганизмов во внутреннюю среду организма [7;9;10].
В данной статье мы оценивали эффективность применения синбиотика «Нормоспектрум для взрослых» в комплексном лечении больных с воспалительными формами угревой болезни и его влияние на иммунный статус больных акне.
Ключевые слова: Дисбактериоз кишечника, акне, иммунитет, синбиотик.
Клинические и лабораторные данные свидетельствуют о выраженных тенденциях к существованию обратной связи между дисбактериозом кишечника и нарушениями в системе иммунитета, а также корреляции степени выраженности клинических проявлений с интенсивностью и структурой микроэкологических и иммунных нарушений [1;9;10;14], в том числе и при угревой болезни [1;3;4;12]. Продукты метаболизма микроорганизмов в условиях сниженной детоксикационной способности макроорганизма, иммунной реактивности и нарушенной моторики кишечника могут стать причиной аутоинтоксикации, вялого, торпидного течения заболевания, неадекватного ответа к проводимому лечению [13;10;11].
В этой связи представляется актуальным применение у больных с акне иммунобиологических препаратов, включая различные пробиотики, действие которых направлено на коррекцию микроэкологических нарушений, стимуляцию местного и общего иммунитета, детоксикацию организма, нормализацию обмена веществ [1;7;11]. Их использование повышает эффективность лечения и уменьшает объем и спектр использованных для этой цели медикаментозных средств, многие из которых нередко обладают выраженными побочными эффектами [1;2;14].
В последнее время являются доказанными противоинфекционные и иммуностимулирующие эффекты молочнокислых и бифидобактерий благодаря продукции ими разнообразных органических кислот, перекисей, антибиотиков и бактериоцинов [4;5;6].
При лечении угревой болезни помимо стандартных медикаментозных средств и приемов мы использовали синбиотик «Нормоспектрум для взрослых» - мультипробиотический комплекс бифидобактерий и лактобацилл, включающий в себя 9 различных штаммов, относящихся к видам B.bifidum, B.longum, B.adolescentis, L.plantarum, L.acidophilus, L.Casei, а также пребиотические субстанции инулин и олигофруктозу. Содержание бифидобактерий в одной капсуле- не менее 1×108 КОЭ/г, лактобацилл- не менее 1×107 КОЭ/г.
Принципиальной особенностью этого синбиотика является наличие в нем живых лакто-бифидобактерий, принадлежащих видам, наиболее часто обнаруживаемым в толстом кишечнике здоровых взрослых людей.
Использованные штаммы обладают выраженной антагонистической активностью в отношении многих оппортунистических и патогенных бактерий. Кроме того, присутствие в препарате пребиотических субстанций создает селективные преимущества для сохранения жизнеспособности и проявления нормализующей состав симбиотической микробиоты активности вводимых симбиотических бактерий.
Данный комплексный синбиотик также обогащен витаминно-минеральным комплексом, включающим в себя наиболее распространенные кофакторы важнейших метаболических процессов (витамины: Е, С, В1, В2, В6, В12, никотинамид, пантотеновая кислота, фолиевая кислота, биотин; минеральные вещества: цинк, селен).
Другая группа больных получала иммуномодулятор Полиоксидоний (ПО).
Было проведено обследование и лечение 68 амбулаторных больных, отобранных методом случайной выборки, с воспалительными формами угревой болезни, которые отмечали отсутствие или низкую эффективность проводимого ранее лечения. Возраст пациентов составил от 17 до 32 лет, давность заболевания от 3 до 10 лет. Оценку исходного клинического состояния и его улучшение после проведенного лечения с использованием синбиотика «Нормоспектрум» и ПО осуществляли на основе анализа общепринятых объективных и субъективных дерматологических показателей, а также динамического изучения состояния иммунной системы больных (до и после окончания курса лечения) по качественным и количественным показателям клеточного и гуморального иммунитета, а также их функционального состояния.
Определялись содержание в периферической крови количества лейкоцитов, лимфоцитов, Т-лимфоцитов и их основных субпопуляций
(CD3, CD4, CD8), В-лимфоцитов (CD21, CD19), натуральных киллерных клеток NK (CD16) c использованием коммерческих наборов моноклональных антител с применением метода проточной цитометрии. В основе метода лежат взаимодействие двухцветных моноклональных антител IMMUNOTECH (Франция), меченых флюоресцентной меткой, с поверхностными антигенами лимфоцитов и последующий анализ образцов на проточном лазерном цитофлуориметре EPICS XL (ВECKMAN COULTER, США). Функциональная активность Т-лимфоцитов изучалась в реакции бластной трансформации лимфоцитов на ФГА, определение уровня иммуноглобулинов IgA, IgG, IgM в сыворотке крови осуществляли методомрадиальной иммунодиффузии в геле по Manchini.
IgE- иммуноферментным методом. Исследование иммунного статуса проводилось всем больным до начала лечения и через месяц. Исследования проводили в ООО «Научного центра ЭФиС» и МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского.
Статистическую обработку данных проводили с использованием статистического пакета IBM SPSS Statistics 19 с вычислением t-критерия Стьюдента-Фишера. Различие между двумя средними величинами считали достоверными при р<0,05.
Все больные в зависимости от примененного курса лечения были разделены на 3 сопоставимые по основным клинико- функциональным характеристикам группы: основные(2) и контрольная (1).
Больным основной группы (27человек) после предварительного клинико-лабораторного обследования на фоне традиционного лечения назначали синбиотик «Нормоспектрум для взрослых» ежедневно по 1капсуле 3 раза в день за 20 минут до еды, запивая водой; длительность приема составила 30 дней. Группа больных, получавших ПО составила 30 человек. ПО вводился больным инъекционно по схеме: 6мг/сутки в/м в 1-й,2-й, 5-й, 8-й,11-й дни лечения (схема разработана ГНЦ- институт иммунологии МЗ РФ, Москва, 2006г.) в комплексе с общепринятым медикаментозным лечением.
Больные контрольной группы (11человек) получали традиционное лечение.
Результаты и обсуждение: Результаты клинико-лабораторных исследований больных с воспалительными формами акне показали, что все они предъявляли те или иные жалобы, связанные с основным заболеванием. При изучении иммунных показателей группы больных акне (27 человек), получавших лечение синбиотиком «Нормоспектрум для взрослых» и группы больных, получавших ПО (30 человек) рассматривалась динамика изменений после проведенного лечения как в среднем по группе, так и с учетом исходно измененных иммунных показателей.
Иммунологический анализ данных показал, что количество лейкоцитов и лимфоцитов до лечения соответствовало допустимому разбросу у здоровых лиц и под влиянием лечения синбиотиком «Нормоспектрум для взрослых» достоверно не менялось. В некоторых случаях количество лимфоцитов после лечения возрастало с минимальных значений до нормы. Общее количество Т-лимфоцитов (СД3) в процентном и в абсолютном значениях исходно было ниже показателей здоровых лиц (51,45+3,12% против 68,4+3,4%) и (737,4±52,2×106 /л против 1453,9±53,4×106 /л) р<0,05.
Общее количество процентного содержания В-лимфоцитов (СД19) в среднем по группе соответствовало показателям нормы и после лечения менялось незначительно, а абсолютный показатель СД19 (за счет сниженного процента лимфоцитов) был существенно ниже нормы и на фоне проводимой терапии достоверно увеличивался. Отмечалось достоверное снижение исходно (СД4) - Т-хелперов по сравнению с нормой (26,9+2,8% против 40,5+4,1%) и (210,8+11,8×106/л против 595,8+14,5×106/л), р<0.05 которые после лечения существенно возрастали.
Абсолютные показатели (СД4) - Т-лимфоцитов хелперов, которые до лечения были достоверно ниже нормы, в среднем по группе на фоне лечения возрастали до нормальных значений с 210,8±11,8×106/л до 9,2×106/л, р<0,05.
Исходно выше нормы определялось количество Т-цитотоксических лимфоцитов (СД8) в процентном показателе (37,44±1,8% против 26,7±2,3%) р<0,05 после лечения этот показатель соответствовал норме. Иммунорегуляторный индекс (ИРИ) до лечения был ниже нормы, что указывало на дисбаланс иммунорегуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов, соотношение СД4/СД3. На фоне лечения ИРИ существенно возрастал, но не достигал значений нормальных показателей.
Уровни сывороточных IgA и IgG после лечения имели тенденцию к повышению (с 1,8±0,1г/л до 2,05±0,22г/л), р<0,1 и IgG достоверно увеличивался (с 11,05г/л до 14,13±0,35г/л), р<0.05 соответственно.
Функциональная активность лимфоцитов по индексу стимуляции в РБТ на ФГА была исходно сниженной и после лечения до нормы не восстанавливалась. Показатели количества натуральных киллерных клеток (ЕКК-СД16, СД56) исходно в процентном отношении были в среднем по группе выше значений здоровых лиц, на фоне лечения этот показатель нормализовался.
Исходно сниженные значения общего пула Т-лимфоцитов (СД3) (табл.2) как в процентном содержании (42,3±4,8% против 68,4±3,4%), р<0,05, так и в абсолютных значениях 591,7±21,2×106/л против 1454+53,4×106/л после лечения увеличивались, приближаясь к норме. Сниженными почти в 2 раза оказались СД4 клетки-Тлимфоциты хелперы, как в процентном, так и в абсолютном показателе, после лечения количество СД4 клеток возвращалось к норме. Процентное количество СД8 клеток (Т-цитотоксических лимфоцитов) исходно было повышенным в 38% случаев, после лечения этот дисбаланс устранялся. ИРИ, исходно значительно сниженный, после лечения существенно возрастал, однако значений нормы не достигал.
Общее количество В-лимфоцитов (СД19) в процентах, исходно соответствовало норме в среднем по группе. Однако количество исходно сниженных и исходно повышенных показателей во всей группе было примерно равными. Исходно низкие значения (СД19) с 5,6±1,2% против 12,3±1,2% после лечения повышались почти до нормы, а исходно повышенные показатели (СД19) (22,5±2,1% против 12,3±1,2%) снижались, приближаясь к показателям нормы. Аналогичная динамика наблюдалась и по отношению к абсолютным показателям СД19 (В-лимфоцитам). Исходно низкие абсолютные значения (72,8±10,2×106/л) увеличивались до (242,0±11,8×106/л), р<0,05, приближаясь к нормальным значениям, а исходно высокие: (326±5,8×106/л) до лечения снижались до 259,6±7,4×106), почти до нормы.
Наблюдалась положительная динамика иммуноглобулинов, продукта В-лимфоцитов. Так, повышенное количество IgA снизилось с (3,4±0,1г/л до лечения до 2,1±0,2г/л после лечения), р<0,05; количество IgG уменьшилось с (17,05±1,0г/л до лечения до 11,78±1,0г/л после лечения). Уровни IgE c 238.3±27 МЕ снизились до 125,2+15,2 МЕ после лечения, но нормы не достигали (87МЕ- верхний показатель).
В контрольной группе достоверной позитивной динамики не наблюдалось.
Иммунные показатели у второй группы больных, получавших полиоксидоний (ПО), анализировались с учетом результатов двух тестовых наборов: с использованием моноклональных антител.
Показатели фенотипов лимфоцитов до и после лечения ПО, по сравнению с показателями здоровых лиц, принятых за норму, исходно в среднем по всей группе сниженными оказались Т- лимфоциты как в абсолютном показателе (925,4+18,2×106/л по сравнению 1513,3+62,5×106/л) р <0,05, так и в процентном отношении (55,2+4,13% против 72,2+3,17%) р<0,05.
После лечения количество Т-лимфоцитов достоверно возросло в абсолютном значении с 925,4+18,2×106 /л до 1494+28,2×106/л, р<0,05 и наблюдалась тенденция к их увеличению по относительному показателю (с 55,2+4,13% до 68,4+5,12%), р<0,1.
До лечения полиоксидонием отмечалось достоверное снижение иммунорегуляторной субпопуляции СД-4 Т- клеток хелперов/индукторов как в процентном (26,2+2,2 против 41,67+4,91, р<0.05), так и в абсолютном показателе (535,4+22,1 против 907,2+21,4, р<0,05).
Количество СД-8 Т-цитотоксических лимфоцитов в среднем по группе исходно находилось на верхней границе нормы по обоим показателям и после лечения существенно не менялось. Иммунорегуляторный индекс (ИРИ) исходно был достоверно ниже показателя здоровых лиц, что указывало на нарушение соотношения СД4/СД8 в основном за счет сниженной Т- хелперной (СД4) субпопуляции. После лечения ПО и увеличения количества СД4 (с 26,9+2,2% до 39,2+2,2%), р<0,05, показатель ИРИ значительно увеличился, но нормы не достиг (0,93+0,2 против1,5+0,12 при норме 1,75+0,1).
Количество В-лимфоцитов (СД19) соответствовало показателям нормы и после лечения ПО существенно не менялось. Уровни иммуноглобулинов A, M, G исходно были в норме и после лечения ПО оставались без изменений. Функциональная активность лимфоцитов в реакции бластной трансформации (РБТ) на фитогемаглютинин (ФГА) по показателю индекса стимуляции исходно была сниженной, а после лечения ПО возросла до нормы.
Показатели СД16 (NK) натуральных киллерных клеток находились в среднем по группе в пределах нормы как до, так и после лечения.
Анализируя динамику исходно измененных показателей фенотипов лимфоцитов на фоне лечения ПО можно отметить более наглядное корригирующее влияние препарата ПО как на Т-клеточное, так и В-клеточное звенья иммунитета.
Так, после лечения достоверно увеличилась исходно сниженная СД3 Т-лимфоцитарная популяция (с 780,4+22,1 до 1428+18,5, р<0,05) в абсолютных значениях и с тенденцией к росту в процентном отношении (с 50,4+3,12% до 67,82,+11,7%,р<0,1). Исходно сниженные показатели Т-хелперной (СД4) субпопуляции достоверно увеличивались после проведенного лечения как в процентах (с25,8+2,2 до 38,5+3,2, р<0,05), так и в абсолютных значениях (с 450,1+12,1 до 895,42+10,2, р<0,05).Повышенные значения Т-цитотоксических лимфоцитов(СД8) имели лишь тенденцию к снижению, однако соотношение иммунорегуляторных субпопуляций улучшалось, а ИРИ достоверно возрастал с 0,76+0,1до 1,6+0,1, р<0,05.
У части больных мы отмечали исходно сниженное количество В-лимфоцитов (СД19). После курса лечения ПО данные показатели достоверно увеличивались в процентном отношении с 5,4+0,5 до 9,3+1,2%, р<0,05, а в абсолютном выражении с 99,16+22,4 до 215,3+18,4, р<0.05.
Исходно повышенное количество натуральных киллерных клеток (СД16) после лечения ПО снижалось с 22,82+2,8 до 15,8+1,4, (р<0.1) в процентах и с 425,5+12,2 до 322,2+31,4, (р<0,05) в абсолютном показателе.
Таким образом мы отмечаем более выраженное влияние ПО на исходно измененные показатели Т-лимфоцитов (СД3), Т-Хелперов (СД16), Т-цитотоксических клеток (СД8) и их соотношения (ИРИ), а также но В-лимфоциты (СД19) и NK клетки (СД16).
В отличие от симбиотика «Нормоспектрум» полиоксидоний существенно улучшал функциональную активность лимфоцитов по показателю индекса стимуляции.
Наличие взаимосвязи между дисбиозом кишечника и снижением иммунитета у больных акне (15,16) обосновывает необходимость включения синбиотика «Нормоспектрум для взрослых» и иммуномодулятора полиоксидония в схемы восстановительного лечения данной группы дерматологических больных.
Список литературы